ENA多肽抗體譜的多的檢檢測方法

　　核抗原有三個組成部分：組蛋白、DNA、肽抗體譜可溶性核抗原，測方后者因可溶于磷酸鹽緩沖液(或生理鹽水)中，多的檢故名可提取核抗原(extractable nuclear antigen，肽抗體譜ENA)。測方從分子水平識別ENA多肽抗體是多的檢20世紀80年代抗核抗體研究的重大進展，現已發現這類抗體有十余種，肽抗體譜抗ENA抗體為其總稱。測方

　　檢測ENA抗體過去多用瓊脂雙向擴散、多的檢對流免疫電泳，肽抗體譜近年來也建立ELISA法。測方現已從免疫擴散法發展到與分子生物學有關的多的檢免疫印跡技術(1BT)，且國內已有抗ENA多肽抗體譜檢測試劑盒出售。肽抗體譜IBT與對流電泳和雙擴法相比，測方更敏感特異，且操作簡單快速，不需特殊設備，整個檢測時間一個半小時即可完成，能在各級醫院應用，從而將風濕性疾病的診斷和鑒別診斷提高到分子水平。

　　1，ENA多肽抗體譜檢測原理 通過對抗原抽提及酶聯免疫檢測技術的改進，將抗原中的蛋白質分子按分子量大小分離后轉移至硝酸纖維素膜上，通過與抗體反應，觀察與特異性抗體反應的多肽的分子量和數量，不僅可以用來檢測自身抗體，還可用于抗原分子的組成及抗原表位的研究。試劑盒中已將具有7種不同抗原性的ENA，如Sm、ulRNP、SSA、SSB、Jo-1、Scl-70和Rib等印跡在硝酸纖維素膜上，可通過IBT一次檢測這7種自身抗體。

　　2.試劑 試劑盒內有濃縮洗滌液、酶標抗體、顯色劑A、顯色劑B、終止液、印跡薄膜。

　　3.操作步驟

　　(1)將濃縮洗滌液用蒸餾水按說明書進行稀釋，然后每槽各加lmL，同時每槽加待測血清lOpL，充分混勻，置37℃孵育30rain。

　　(2)取出反應槽，棄去槽中液體，用吸水紙吸干，加入已預溫37%的洗滌液，搖動洗滌4次，每次每槽加lmL，洗1min。

　　(3)每槽加入洗滌液0.5mL，再加所提供的酶標抗體10uL，混勻后置37%孵育30rain。

　　(4)同上洗滌后，加入顯色劑A0.5mL+顯色劑B0.5mL，作用5～10min。

　　(5)待陽性帶顯色清晰，即加終止液0.5mL，2min后棄去液體，用自來水洗滌后取出薄膜，待干后即可判斷結果。

　　4.結果判斷 將薄膜上顯色帶與陽性標準帶對照即可判斷出陽性自身抗體。如：①顯色區帶是29kD、28kD、13.5kD為抗Sm抗體;②顯色區帶是73kD、32kD、17.5kD為

　　抗ulRNP抗體;③顯色區帶是52kD為抗SSA抗體;④顯色區帶是48kD、47kD、45kD為抗SSB抗體;⑤顯色區帶是86kD、70kD為抗Scl-70抗體;⑥顯色區帶是55kD為抗Jo-1抗體;⑦顯色區帶是38kD、16.5kD、15kD為抗Rib抗體。

　　5.注意事項 ①判斷結果時，應將薄膜記號線與標準帶“0”線對齊;②不同批號的標

　　準帶不可混用。

　　6。臨床意義 抗Sm是SLE的標志抗體且與狼瘡性腎炎活動程度相關。抗ulRNP是MCTD的標志抗體，少見于SLE、PSS等;抗SS-A和抗SS-B是SS的標志抗體，少見于SLE、MCTD、PSS等;抗Scl-70是PSS的標志抗體;抗Jo—1是PM/DM的標志抗體;抗Rib是SLE的標志抗體，少見于PSS等。

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