貼壁細胞細胞消化傳代辦法

　　貼壁細胞在培育瓶長成致密單層后，貼壁繼續生長的細胞細胞消化空間十全十美，培養基中的傳代營養成份也耗費較多，同時代謝廢物也有較多堆積，辦法需要分瓶培養，貼壁對細胞進行傳代擴增。細胞細胞消化

　　貼壁細胞消化傳代4種方法

　　方法一:加入胰酶等細胞脫落伍，傳代再加培養基中斷胰酶作用，辦法離心傳代。貼壁

　　方法二:加入胰酶后，細胞細胞消化鏡下觀察待細胞始脫落時，傳代棄胰酶，辦法加培養液分瓶。貼壁

　　方法一太費事，細胞細胞消化方法二有可能對細胞施加胰酶抉擇，傳代由于總是貼壁不牢的細胞先脫落，對腫瘤細胞總而言之，這部分細胞有可能是惡性程度較高的細胞亞群。

　　方法三:加入PBS洗去血清或加入胰酶先中和血清的作用(30s)，棄之，再加入適度胰酶作用10s-40s(依據細胞消化的難易程度)，棄之，這樣依賴殘余的胰酶就可將細胞消化單細胞。對于較難消化的細胞，能夠用2%利多卡因消化5-8分鐘，然后再棄去，加培養基吹打也能夠，對細胞的影響不大。

　　方法四(應付難消化細胞的):取舍培養液后，用0.04%的EDTA沖洗一次，再用1/4v的0.04%的EDTA室溫孵育5min，取舍大部分EDTA，加入與剩余EDTA而語的胰酶(預熱)總體積1/10v。消化到有細胞脫落。

　　細胞消化時日由細胞類型、消化液的消化能力、細胞的密度等多種要素決定

　　一般養一種新的細胞要探索一下消化時日，掌握細胞消化到什么程度恰到益處。新配的消化液消化能力較強，配好后可分裝成小管，一次用完，其他凍在-20℃，以保持酶活力。消化液只要鋪滿瓶底即可，可放入培養箱中，因外在37℃時酶的活力高于常溫，有利于縮小消化時日。還有一種方法，就是將胰酶鋪滿瓶底后，輕搖培養瓶，使胰酶與細胞充分解除，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段時日，待細胞間空隙增大，瓶底呈花斑狀即可。細胞生長到覆蓋70～80%瓶底時消化較好，若細胞密渡過大則消化后細胞易成團。

　　聯系人：謝經理 聯系電話：15013026997本文來自廣州市格瑞林生物科技有限公司，如有轉載請注明出處http://biogreen.china.herostart.com